凤凰体育App 微生物的接种与培养_生物学_自然科学_专业信息

日期:2021-02-14 02:09:31 浏览量: 72

微生物培养方法实验目的:学习和掌握无菌操作技术;学习接种方法;学习分离和纯化细菌种类的常用方法。 一、接种在人工培养基或适合其生长和繁殖的活生物体上接受微生物的过程称为接种。 1、疫苗接种工具和方法实验室中最常用的疫苗接种工具是接种环和接种针。由于不同的接种要求或方法,接种针的尖端通常由不同的形状制成,包括刀形和耙形。有时滴管和吸管也可以用作液体接种的接种工具。为了将细菌液体均匀地涂覆在固体介质的表面上,需要涂覆棒。 (图片1)ͼ1接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4. 5.玻璃涂布棒6.接种环7.接种8.常用的小手术刀接种方法有几种:1)条纹接种是最常用的接种方法,即可以通过在固体培养基表面上来回线性移动来实现接种,常见的接种工具是接种环。 2)研究霉菌的形态时,通常使用三点接种法接种微生物后平板需怎样培养,该方法是将板表面上的少量微生物接种到等边的方法中。三角形三点,让它们各自形成细菌,以观察和研究其形态;除三点外,还有一个或多个要接种的点3)经常使用穿刺接种d保存厌氧细菌或研究微生物的动力学。使用此方法。

进行穿刺接种时,使用的接种工具是接种针。所使用的介质通常是半固体介质。其方法是:用接种针浸入少量细菌,然后沿半固体培养基的中心笔直穿刺至试管底部。如果某种细菌具有鞭毛并且可以移动,那么它可以在穿刺线周围生长。 4)倾倒和接种的方法是将待接种的微生物放入培养皿中,然后倒入冷却至约45°C的固体培养基中,轻轻迅速地摇动,以使细菌溶液达到稀释的目的。板固化后,在合适的温度下培养以生长单个微生物菌落。 5)涂层接种与浇注接种略有不同,即先将平板倒入板中使其固化,然后将细菌液倒入平板上,然后快速使用包衣棒来回涂覆表面以使细菌液体均匀分布抢庄牛牛 ,可以生长单个微生物菌落。 6)液体接种将细菌从固体培养基中洗涤,然后将其倒入液体培养基中,或从液体培养物中倒出,将细菌液体吸移到液体培养基中,或从液体培养基中转移细菌。转移到固体培养基中,可以称为液体接种。 7)注射疫苗接种此方法使用注射将要接种的微生物转移到活生物体中,例如人或其他动物。常见的疫苗接种是使用注射剂进入人体以预防某些此类疾病。 8)活接种活接种是一种专门用于培养病毒或其他病原性微生物的方法,因为必须将病毒接种在活生物体中才能生长和繁殖。

所使用的生物可以是整个动物;它也可以是孤立的活组织,例如猴肾等;它也可以是发达的鸡胚。疫苗接种的方法是注射,也可以用混合材料喂养。 2、在对无菌操作介质进行高压灭菌后,使用无菌工具(例如接种针和吸管)在无菌条件下接种含细菌的材料(例如样品,草坪或细菌悬浮液)。在介质上,此过程称为无菌接种操作。实验室测试中的各种接种必须是无菌的。无论实验台采用哪种材料,都必须光滑且水平。光滑度便于用消毒剂擦洗;水平是为了在倒入琼脂培养基时保持培养皿中板的厚度一致。在实验平台上方,气流应缓慢,细菌应减至最少,周围细菌应尽可能少。因此,有必要打扫房间,关闭实验室的门窗真人游戏 ,并使用消毒剂进行空气消毒,以尽可能减少细菌的数量。当气流较小时,空气中的细菌会随灰尘一起掉落,因此,接种时,打开培养皿的时间应尽可能短。用于接种的设备必须通过干热或火焰进行灭菌。接种环的火焰灭菌方法:通常将接种环在火焰上完全燃烧(接种柄,同时将其缓慢通过火焰三遍),冷却,首先接触培养基,然后等待接种环冷却至室内温度。它可以用来挑选出含有细菌的物质或细胞,并迅速将它们接种在新的培养基上。 (图片2)然后,将接种环从手柄到其末端逐渐进行火焰消毒,以使其恢复原状。

请勿直接燃烧环,以免残留在接种环上的细菌爆炸并污染空间。在平板接种中,通常倾斜平板表面并打开皮氏培养皿盖的一小部分进行接种。当将培养基倒入或接种到培养皿中时,请勿用试管或瓶壁的嘴接触底皿的侧面。试管或瓶子的嘴应倾斜并通过火焰。 slope2边坡接种时的无菌操作(1)接种灭菌(2)打开棉塞(3)喷嘴灭菌(4)捡起苔藓(5)接种(6)塞满棉花塞二、含有一种以上微生物的培养物的分离纯化称为混合培养,如果菌落中的所有细胞均来自一个亲代细胞,则该菌落称为纯培养物,在鉴定菌株时,通常要求所用微生物是纯培养物的获得过程称为分离和纯化,有很多方法1、倾板法首先使微生物悬浮液经过一系列稀释,然后加入一定量的稀释剂并充分混合融化的融化物。营养琼脂培养基保持在约40〜50°,然后倒入无菌培养皿中,固化后,将板倒置在恒温箱中培养,多次发酵后单个细胞形成菌落费法。取一个菌落制成悬浮液,并重复上述步骤几次,以获得纯净的培养物。 (图3,a)图3倾板法(a)布板法(b)图解1.细菌悬浮液2.熔融介质3.培养物4.无菌水2、包被板法首先,微生物适当稀释悬浮液,并取一定量的稀释剂将其放在无菌的固化营养琼脂平板上接种微生物后平板需怎样培养,然后用无菌玻璃刮刀将稀释剂均匀地铺在培养基表面。恒温培养后,可获得单个菌落。

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(图3-5,b)3、分离微生物的最简单方法是平板条纹法。使用无菌接种环取少量培养物并在平板上划线。划线方法有很多,对单个菌落的常用划线方法有斜线法,曲线法,方法,辐射法和四栅法。 (图片4)当接种环在培养基表面上移回时,接种环上的细菌溶液逐渐稀释,最后一个细胞散布在绘制的线上。培养后,每个细胞长成一个菌落(图片4) 4、富集培养方法富集培养方法的方法和原理非常简单。我们可以为仅所需微生物的生长创造一些条件。在这些条件下,所需微生物可以与其他微生物有效地相互作用微生物比其他微生物更具竞争性,并且具有更强的生长能力,创造的条件包括选择最合适的碳源,能量,温度,光,pH,渗透压和氢受体等。条件反复移植后,最终富集的菌株很容易在固体培养基上生长单个菌落。寄生细菌时,必须将样品接种到相应的敏感宿主细胞群中,以使其大量繁殖。可以通过重复移植获得纯寄生虫。 ͼ4平板条纹分离法1.斜线法2.曲线法3.方形法4.辐射法5.四格法5、厌氧法在实验室中,为了分离一些厌氧菌,可以将装有原始培养基的试管用作培养容器,并且可以在0浴沸水中加热该试管数分钟以将其排出。培养基中溶解的氧气。

然后迅速冷却并接种。接种后,在培养基表面添加无菌石蜡,以使培养基与空气隔离。另一种方法是在接种后使用N2或CO2替代培养基中的气体,然后将试管口密封在火焰上。有时为了更有效地分离某些厌氧细菌,可以将分离的样品接种到培养基上,然后将培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 三、培养微生物的生长不仅取决于其自身的遗传特征,而且还受许多外部因素的影响,例如养分浓度,温度,湿度,氧气和pH值。不同类型的微生物具有不同的培养方法和条件。 1、影响微生物生长的因素微生物的生长不仅取决于其自身的遗传特征,而且还受许多外部因素的影响。影响微生物生长的因素很多,下面简要介绍。 1)营养物浓度细菌的生长速率与营养物浓度有关:μ=μmax * C /(K + C)。营养物浓度与生长速率之间的关系曲线是典型的双曲线。 K值是细菌生长的非常基本的特征常数。它的值很小,表明细菌所需的营养物质浓度很低,因此在自然界中,它们无处不在。但是,当营养过低时,细菌将在生长中遇到困难,甚至死亡。这是因为除了生长所需的能量外,细菌还需要能量来维持其生存。该能量称为维持能量。另一方面,随着营养物浓度的增加,生长速率逐渐接近最大值。

2)温度在一定温度范围内,每种微生物都有其自身的三个生长温度基本点:最小生长温度,最佳生长温度和最大生长温度。在生长温度的三个基点内,微生物可以生长,但生长速率不同。仅当微生物处于最佳生长温度时鸭脖娱乐 ,生长速度才最快,而生成时间最短。高于最低生长温度,微生物将无法生长,温度过低甚至死亡。如果超过最高生长温度,微生物的生长也将停止并且温度过高。也会死。通常,每种微生物的生长温度的三个基本点是恒定的。但是它也经常受到其他环境条件和变化的影响。根据微生物最佳生长温度的差异,可以将其分为三种类型:a。嗜冷微生物:适宜的生长温度大多在-10℃至20℃之间。 b。中度温度的微生物:最佳生长温度平均为20°C至45°C。嗜热微生物:生长温度高于45°C。 3)水分水分是微生物生长的必要条件。孢子和孢子的萌发首先需要水。没有水,微生物就无法生存。但是微生物只能在水溶液中生长,而不能在纯水中生长。各种微生物在无法生长和发育的水活度范围内具有狭窄而适当的水活度区域。 4)氧气根据微生物的氧气需求,它们可以分为以下五种。一种。有氧微生物:这些微生物需要氧气才能呼吸。没有氧气,它就无法生长,但是高浓度的氧气也对好氧微生物有毒。

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许多好氧微生物无法在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下生长。大多数微生物都属于这种类型。 b。兼性需氧微生物:这些微生物可以在有氧或无氧条件下生长,但是它们的代谢途径不同。在没有氧气的情况下,它会进行发酵,例如通过酵母进行厌氧乙醇发酵。 C。微需氧微生物:这些细菌需要氧气,但它们仅在0. 2大气中生长最佳。这可能是由于它们包含在强氧化条件下会失活的酶,因此只能在低压下工作的事实。 d。耐氧微生物:这些微生物在生长过程中不需要氧气,但是他们不惧怕氧气的存在,也不会被氧气杀死。 e ..厌氧微生物:这些微生物在生长过程中不需要分子氧。分子氧的存在对其生长有毒,被抑制或杀死。 2、耕种方法1)根据耕种期间是否需要氧气,可将其分为两类:有氧栽培和厌氧栽培。有氧训练:也称为“有氧训练”。也就是说,在培养这种微生物时九州体育 ,需要添加氧气,否则将不能很好地生长。在实验室中,倾斜培养是通过棉塞从外部获取无菌空气。锥形瓶中的液体培养物大多通过摇床摇动,以使外部空气不断进入瓶中。厌氧培养:也称为“厌氧培养”。此类微生物不需要氧气即可参与培养。在厌氧微生物的培养过程中,最重要的一点是去除培养基中的氧气。

通常,可以使用以下方法:降低培养基中的氧化还原电位:通常在培养基中添加还原剂(如谷胱甘肽,硫代乙酸盐等)以达到目的。将某些动物的一些死或活组织(例如牛心和羊脑)添加到培养基中,这也适合厌氧细菌的生长。 b。化学脱氧:有很多方法凤凰彩票 ,主要是:用焦没食子酸吸收氧气;用磷吸收氧气;使用好氧细菌和厌氧混合培养吸收氧气;使用植物组织(例如发芽的种子)吸收氧气;产生氢气和氧化的方法相结合以除去氧气。 C。隔离并阻断氧气:深层液体培养;用石蜡油密封;半固体穿刺培养。 d。更换氧气。用二氧化碳代替氧气;用氮气代替氧气;用真空代替氧气;用氢气代替氧气;用混合气体代替氧气。 2)根据培养基的物理状态,可以分为固体培养和液体培养。固体培养:将细菌种接种到松散且营养丰富的固体培养基中并在适当条件下培养微生物的方法。液体培养:在实验中,液体培养可使微生物迅速繁殖并获得大量培养物。在某些条件下,这也是微生物选择和增加细菌的有效方法。 四、常见的菌株保藏方法菌株的保藏通常采用干燥,低温和空气隔离等措施,以将其代谢限制在最小范围,从而使其生命活动处于半永久性休眠状态,从而这些菌株可以生存并且不会污染细菌,不会发生或突变少,并且可以保留细菌的原始生物学特性。

更常用的应变保存方法包括倾斜或半固态通道保存方法,以及冷冻真空干燥方法和液氮超低温保存方法。还存在载体保存方法和悬浮液保存方法。 1.偏斜或半固体传代保存方法该方法中常用的细菌种保存培养基包括普通肉汤琼脂斜面,血清斜面,血琼脂斜面,卵偏斜和血清肉汤半固体培养基等。通常将灭菌的液体石蜡添加到倾斜平面或半固体介质的表面以隔离空气。另外,厌氧菌的传代保存经常使用酸痛的肉基。 2.冷冻-真空干燥法是将细菌悬浮液与某种保护剂(例如无菌脱脂牛奶)冷冻,然后在冷冻状态下真空干燥,使细菌培养物处于半永久性休眠状态,从而达到长期保存的目的。通常可以保存几年甚至几十年。此方法需要特殊的低温干燥设备,其操作过程简要显示在下图中。 3.液氮冷冻保存法将保存的细菌分散在保护剂中(例如甘油,二甲基枫,蔗糖和吐温80等),或阻塞平板上生长良好的培养物并将其完整地放在保护剂中,已预先冷冻并储存在液氮超低温(-196℃)中。该方法是目前菌株保藏的理想方法,可以将菌株保存更长的时间。